1
Тромбоциты – простейшие.
Авторы: Лифановский М. В., Ульман В.А.
Работа выполнялась: Домашняя лаборатория, г. Баку  
Переписку вести:   Ульман В.А. 238600, а/я 23, г. Славск, Калининградская область. E-mail: ulmann@baltnet.ru
Источник финансирования: личные средства.
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                                                                                

                                               2
 The resume.
By the purpose of research was reveal an etiology of disease of L. L.А..
 Septic rheumatic carditis, crossing in chronic, septic endocarditis, chronic sepsis. For ill the combined mitral fault, and on a mean third of dextral femur - metastatic abscess was derivated. Ill was sick 13 years and has deceased per 32 years from disturbance of a cerebral circulation, in a consequent metastatic abscess of a brain.
      Object of research was a blood of ill L. and able-bodied, arbitrary selected, 53 donors - volunteers and animal (toy fish, rat, dog, rabbit, grapnel and chicken).
      The methods of observations and analytical methods, as well as instrumentation, with rare exception, were applied generally accepted in hematoly, parasitology, microbiology and at cultivation of cells.
      In all cases the increase both breeding of thrombocytes was marked, and the properties of cultures of exposed thrombocytes were identical.
For ill L. from separated metastatic abscess and from an eye, ear and nose, before mors the culture of thrombocytes was exposed only.
The thrombocytes are elementary - colonial suctorial infusorians.
They probably belong to the type of protosoa, class of infusoria, order of colonial suctorial infusoria.
Keywords
Thrombocytes, thrombosis, hemostasis, cardiovascular system, rheumatic disease, chronic sepsis, education blood, blood
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Резюме.
 
Целью исследования было выявить этиологию заболевания Л-ой Л.А..
 Септический ревмокардит, перешедший в хронический, септический эндокардит, хрониосепсис. У больной образовался сочетанный митральный порок, и на средней трети правого бедра – метастатический абсцесс. Больная болела 13 лет и скончалась в 32 года от нарушения мозгового кровообращения, вследствие метастатического абсцесса головного мозга.
     Объектом исследования была кровь больной Л-ой и здоровых, произвольно выбранных, 53 доноров-добровольцев и  животных (рыбок гурами, крысы, собаки, кролика, кошки и курицы).
     Методы наблюдений и аналитические методы, как и аппаратура, за редким исключением, применялись общепринятые в гематологии, паразитологии, микробиологии и при культивировании клеток.
     Во всех случаях отмечался рост и размножение тромбоцитов, и свойства культур выделенных тромбоцитов были идентичны.
У больной Л. из отделяемого метастатического абсцесса и из глаз, ушей и носа, перед смертью была выделена только культура тромбоцитов.
Тромбоциты являются простейшими – колониальными сосущими инфузориями.
Ключевые слова
Тромбоциты, тромбоз, гемостаз, сердечно-сосудистая система, ревматизм, хрониосепсис, кроветворение, кровь.
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                                                                                

                                                      3
Введение
К исследованию побудило нас тяжёлое хроническое заболевание Л-ой Л.А., длившееся 13 лет.  Первые признаки болезни проявились в период первой беременности. Больная скончалась в возрасте 32 лет от нарушения мозгового кровообращения, явившегося следствием метастатического абсцесса головного мозга[u1]. Септический ревмокардит, перешедший в хронический, септический эндокардит, хрониосепсис, сочетанный митральный порок, и на средней трети правого бедра – метастатический абсцесс, который прошел, после хирургического вмешательства. Лихорадка - почти ежегодно, весной и осенью  по четыре месяца с температурой 38 – 400 Цельсия.
Визуальные наблюдения и фотографирование  проводились с микроскопом БИОЛАМ  С-1. Освещение искусственное, по Кёлеру. Использовали фотокамеру «Зенит», 16 мм кинокамеру  и фотоплёнку типа «А-2» и «Фото-65». Выращивание культур проводили в термостате. Стерилизация проводилась в автоклаве, сушильном шкафу, пропусканием через  миллипоровые фильтры и облучением ультрафиолетовыми лучами.
Фиксация мазков осуществлялась этиловым и метиловым спиртами, смесью Никифорова, нагреванием, парами формалина и дихлорэтана или их комбинированием.
Окраска проводилась по Романовскому – Гимзе, метиловым синим, по Лёффлеру в модификации Пешкова, по Шуренковой, по Нохту, раствором Люголя.  
Наблюдения нативных препаратов велось в обычной камере Цейса и в камере, изготовленной травлением, без сетки. Покровные стекла подбирались по интерференционным кольцам.
Кровь бралась из пальца и локтевой вены в боксах: настольном и специальных комнатах, под контролем  ультрафиолетового облучения, в шприц или пробирку. Место укола мылось водой с мылом и обрабатывалось бензином, спиртом разной концентрации, йодом, эфиром и хлороформом.            
 
 
 
 
 
 
 
                                                                                

                                       

Прикрепление микроорганизмов к эритроцитам, как и истощение последних, заметно  в период лихорадки на любом мазке крови. Микроорганизм  в виде цепочки может прикрепиться к эритроциту, одновременно несколькими звеньями.  
Мембрана микроорганизмов плотная, краска проникает плохо. Высокой степени проникновения можно достичь, изъяв жиры из мембраны. Следовательно, для питательных веществ мембрана непроницаема. При наблюдении за отдельной клеткой было видно (фото 2), что она соединялась с эритроцитом посредством тонкой короткой нити и постоянно колебалась с периодом до 10 секунд. Эта активность чередовалась с периодами затишья. Эти колебания сопровождались изменением её формы: от шаровой к бобовидной и обратно. При приближении клетки к эритроциту часть её поверхности, обращенная к нему, повторяла его форму. При этом никогда не наблюдалось соприкосновение клетки с эритроцитом. Нити, прикреплённые к эритроцитам, двигались, змеевидно изгибаясь, видимая бегущая волна была ангармонической. При таком движении клетка работает как насос. Её объем меняется. Следовательно, она поглощает и выбрасывает окружающую среду. Об этом свидетельствует также то, что оптическая плотность клетки то становиться высокой, то низкой, с периодом от минуты до нескольких часов.  
Поэтому мы предполагаем, что микроорганизмы имеют голозойное питание и нити, посредством которых они прикреплены к эритроцитам это присоски, входные отверстия, через которые засасывается пища.
Весной и осенью, при культивировании микроорганизмов, можно было наблюдать образование клеток содержащих внутри себя более мелкую клетку. Такие клетки часто прикреплялись к стеклу и совершали движения напоминающие движение присосавшихся  пиявок в банке с водой. После этого в растворе появлялись в большом количестве одиночные, мелкие организмы шаровидной формы (бродяжки), которые интенсивно двигались. На фото 3 виден выход бродяжки из клетки.
Чтобы сделать мембрану клеток проницаемой для красок, мы применили фиксацию  
 
 
                                                                                
                                                      8
мазков парами дихлорэтана до 900 с.                                                                              
При рассмотрении мазков, фиксированных дихлорэтаном и окрашенных по Романовскому – Гимзе, оказалось, что:
1)    эритроциты полностью гемолизировались,
2)    исследуемые клетки хорошо окрасились,                                                                  
3)    они лучше приклеились к стеклу.
Клетки имели большое ядро, окрасившееся в красно-фиолетовый цвет, окружённое тонким слоем цитоплазмы голубого цвета. Нам  удалось подметить картину похожую на деление ядер.
Поражённых эритроцитов оказалось много, что было подтверждено в наблюдениях за нативными препаратами. Иногда на одном эритроците было замечено до 5 клеток.                     
Для большей наглядности мы применяли смешанную фиксацию: 900 секунд смесью Никифорова и, после сушки, 300 секунд парами дихлорэтана. При этом хорошо были видны сохранившиеся эритроциты и на них и между ними микроорганизмы с окрашенными ядрами. Свободно встречались колонии в виде «бус», с произвольным до 9 количеством ядер и цитоплазмой имевшей перетяжки разной глубины по отношению к поперечному сечению микроорганизмов.
 В нескольких случаях мы наблюдали картину, напоминавшую конъюгацию.
В тушевых препаратах капсул обнаружить не удалось.
Методом Леффлера в модификации Пешкова жгутиков обнаружить не удалось, хотя короткие выступы иногда встречались.
Непрерывные наблюдения за всеми формами тромбоцитов показали:   
1) Если тромбоцит мог активно двигаться, он рос и размножался.
2) Все формы взаимно переходные.
3) Морфология зависит от условий культивирования.                                                               
4) Основная форма - кокк овальной формы, всё многообразие это колонии. Палочки  это колонии, образовавшиеся при незаконченном поперечном делении тромбоцитов.
Если ориентация деления нарушена, происходит ветвление клетки, что приводит к образованию колоний произвольной формы.                                                                          
 
                                                                                
                                                      9
Наблюдения, проведённые над кровью и её тромбоцитами 53 доноров-добровольцев, дали одинаковые результаты. Разница в том, что период развития культуры тромбоцитов у разных доноров разный, он может быть более 4 недель. Этот период зависит от состояния здоровья донора и от участка тела, из которого взята кровь.  
Свойства культуры тромбоцитов
Определение производилось общепринятыми методами.  
По Грамму культивируемые клетки окрашиваются положительно.
В клетках и растворе каталаза присутствует, аммиак выделяется, сероводород нет, индол не выделяется. Агар-агар разжижается, возможно, для получения дульцина. В клетках и в колониях имеется гемосидерин. Целлюлоза не обнаружена.
Культивируемые клетки на синтетической питательной среде и сама среда содержат холестерин. Концентрация холестерина в растворе ниже, чем в клетках до 40 раз.
Если в кровь, стабилизированную гепарином, ввести культивированные клетки или среду, в которой они культивировались, то происходит свертывание крови. Сгусток крови, образовавшийся после введения в кровь культивированных клеток и оставленный с ними, через сутки начинает растворяться, а через 3-4 суток полностью лизируется.                                          
Добавление эфирной вытяжки из говяжьего мяса в синтетическую, питательную среду приводит к тому, что в основном развиваются клетки, имеющие грушевидную форму, размером до 5 раз больше, чем клетки, культивируемые без вытяжки. Тоже наблюдается при посеве на мясо-пептодный бульон.  
При добавлении в синтетическую, питательную среду, содержащую культивированные клетки,   свежей  крови,  клетки  в  считанные  секунды  проникают  в   лейкоциты. Последние расширяются и разрушаются. Это особенно хорошо заметно, если питательная среда истощена.    Культура клеток сохраняется  в жидкой среде 5 лет, срок наблюдения. Если мазок крови на стекле не фиксировать и поместить на хранение в воздушной среде при влажности воздуха 80-90%, то клетки будут развиваться, используя вещества, находящиеся на стекле (3 года). На твёрдой питательной среде (высохшей при влажности воздуха от 80 до 90%) культура тромбоцитов существует 15
 
                                                                                
                                          10
 лет, колонии мелкие, отдельные, количество их увеличилось в 9 раз, возможно за счёт того, что они были ранее мелкие и не видимые, а со временем разрослись.
Клетки спор и цист не образуют.
Клетки, полученные в результате культивирования на синтетической, питательной среде, выдерживались сутки в растворе дистиллированной воды. Затем помещались в раствор 0,1 моля щавелевой кислоты с  углеродом 14. Через 5 минут тромбоциты были отделены центрифугированием. Выделенные клетки были промыты 3 раза в 0.9%-ном водном растворе хлористого натрия и 3 раза дистиллированной водой, посуда каждый раз менялась. Проверка
на наличие радиоактивности с помощью счётчиков показала, что она на уровне фона и зафиксировать её удалось только фотографированием. Препарат находился на алюминиевой подложке, которая помещалась на фотопластинку для радиоактивных исследований, время  
экспозиции - одни сутки. Отмытые клетки были помещены в свежую, синтетическую питательную среду при 37 град С. Наблюдения показали, что по сравнению с контролем, меченые клетки первые четыре дня росли и размножались энергичнее, при этом преобладали крупные формы клеток грушевидной формы, а затем культура погибла.
Признаки для идентификации клеток
(выделены из крови человека и животных)
Особенности морфологии и цитологии
1. Форма и размеры разнообразны: кокковидная, палочковидная, имеющая полярные специализированные концы, дисковидная. Могут выпускать псевдоподии. Размеры от 0,4х10-6 до 1х10-5 м (0,4 до 10мкм).
2. Соединения клеток: клетки могут объединяться или  развиваться в колонии: в виде цепочек, которые могут иметь одно или несколько разветвлений, которые могут в свою очередь ветвиться; в виде клеток любой формы, имеющих сплошную цитоплазму, в которой могут, относительно свободно, перемещаться мелкие клетки и выходить из неё.
3. Размеры колоний: цепочки могут иметь длину до 2х10-4 м (200мкм), клетки практически неограниченных размеров.

Литература
1.         Авакян А.А. Атлас анатомии простейших патогенных для человека и животных. М., Медицина, 1976.
2.         Алмазов И.В., Сутулов Л.С. Атлас по гистологии и эмбриологии. М, Медицина,1978
3.          Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы. М. Медицина 1980.
4.         Вепринцев Б.Н. Руководство по культивированию нервной ткани. М. Наука, 1976 г.
5.         Гаврилов О.К., Козинец Г.И., Черняк Н. Б. Клетки костного мозга и периферической крови, М., Медицина, 1985.
6.         Гольдберг Д.И., Гольдберг Е.Д. Справочник по гематологии, Томск, Томский университет, 1975г
7.         Догель В.А Зоология беспозвоночных. М., Высшая школа, 1981
8.         Звяковская И.Н. Влияние сезонов года на функциональные свойства тромбоцитов (рукопись деп. во ВНИИМИ МЗ СССР №11 859-86).
9.         Кощуг Р.К., Ковпрацкий В.С. Клиническое толкование лабораторных исследований в ревматологии. Картя молдовеняскэ, Кишинев, 1974.
10.       Лифановский В.А, «Способ получения тромбоцитов», патент Р.Ф. №2068265, 1992г.
11.      И. Месробяну, Шт. Берчану. Иммунология, иммунохимия, иммунобиология. Академия СР. Румынии, 1977.
12.      Мосягина Е. Н., Торубарова Н.А., Владимирская Е.Б. Болезни крови у детей (атлас). М., Медицина, 1981.
13.      Петровский Б.В., Чазов Е. И., Андреева С.В. Актуальные проблемы гемостазиологии. М, Медицина,1981.
14.      Предтеченский В.Е. Руководство по клиническим лабораторным исследованиям. М.,  
                                                                                
                                                             18
Медгиз, 1960
15.      Райков И.Б. Кариология простейших. Л., Наука, 1967.
16.      Чазов Е.И., Смирнова В.Н. Стенка сосудов в атеро- и тромбогенезе. М., Медицина,1983.
17.      Шиманов Н.С. О происхождении, структуре и делении кровяных пластинок. (Сб.)// Научные труды башкирского медицинского института, 1972г., т.18, стр. 270-273
18.      Янковский А.В. Инфузории. Л., Наука, 1973,т. 2, вып. 1
19. Adams G. A., Swenson S. D., Rock G.: Survival and recovery of human platelets stored to five days in non-plasma medium. Blood, 1986, 67, N 3, 672-67S.
20. Anders 0., Preussner S., Konrad H.: Thrombozytensuwstitution. I. Mit-teilung: Indikation ind klinische Anwending der Thrombozytentransfusion. Z. ges inn. Med. 1986, 41, N 21, 592-595.        
21. Arignani G., Paccfaiarini L., Pagliazino M.: The possible role of blood platelets in tumour growth and dissemination. Haematotogica, 1986, 71, N 3, 245—255.
22. Borber, Hugh R. K.:Immunology for the Clinician. M. Meditsina ,1980.
23. Bergey"s manual of determinative bacteriology, 8th ed.
     24. Bley U.,Bossner. – Verhanlungen der Deutschen Gesellschaft fur Pataloggie.
59.Tagung/Red. von G. Dohm. Jena: VEB G. Fischer Verl.,1976, S. 465.
25. Deans J. P., Grindon A. J. Disproportionate utilization of plateletapheresis donors. Transfusion, 1986, 26, N 5, 488—489.
26.Fagiolo E., Uppa S., Mores N., Oradei A., Aureli V.: Peroxidtive events in stored platelet concentrates. Vox. Scng. 1986, 56, N 1,32—36.
27. Grignani G., Pacchiarini L., Pagliarino M.: The possible role of blood platelets in tumour growth and dissemination. Haematologica. 1986, 71, N 3, 245-255.
                                                                                
                                             19
28. Herman J. H., Kamel H. T.: Platelet transfusion, current techiques remaining problems and             
fiture prospects. Amer. Jpediqtr.HematoL, Oncol., 1987, 9, N 3, 272-286.
29. Heynen M. J., Blockmans D., Verwilghen R. J., Vennylen J.: Congenital macro thrombocytopenia, leucocute inclusions, deafness and proteinuria, Functional and electron microscopic observations of platelets and megakaryo-cutes. Brit. I. Haematoly, 1988,70,N 4, 441—448.
30. Hoak J. C.: Platelets and aterosclerosis. Thrombos., Hemastas. 1988, 14, N 2, 202-205.
31. Hoime S., Heaton W., Courtright M.: Platelet storage lesion in second-generation contaimers: Cotrelation with platelet ATP levels. Vox. sang 1987, 53, N 4, 214-220.
32. Lopez-Fernander M. F., Lopez-Borges C., Martin-Bernal J. A., Sancher R., Villaror L. G., Diez-JarUla J., Battle J.: Type 1IB von Willebrands disease associated with a complex trombocytopenic trombocytathy. Amer. J. Hema tol., 1988, 27, N 4, 291-298.
33. Lydany A., Kellermayer M.: Protein synthesis in human platelets. Clin. Biochem., 1988, 21, N 2, 107—110.
34. Markwardt F., Clusa E.: Beziehungen zwischen Blutpluttchen und Arteirosklerose. Abh. Akad. Wiss. DDR. Abt. Math., Natirwiss, Techn., 1981, N 1, 261-275.
35. de MENN R., Biscan M., Migne J.: Etude ultrastructurale comparec des plaguettes des la grenoville, du vean et de I"homme.Nouv. rev. franc, hematol, 1980, 22, N 3, 294-295.
36. Nachman Ralph L., Policy Margaret.: The platelet as inflammatory cell. Adv. Inflammation Res, Proc. 1st. Inf. Congs Bologna ,1978, vol I, New Jork, 1979, 169-173.                                                    
37. Nievelsteih P. F. E. M., de Grood P. G.: Interaction of blood platelets with the vessel wall. Haemostasis 1988, 18, N 4—6, 342—359.
38. Payne C. M.: Platelet satellitism an ultrastructural study. Amer. J. Pathol. 1981, 103, N 1, 116—128.
 
                                                                                
                                             20
39. Plateletapheresis: An invaluable blood resource. Cleveland Clin. J Med., 1987, 54, N 5, 381—383.
40. Sobick B. P., Schick P.K.: Megakaryocyte biochemisty seminars. Hematol., 1986, 23, N 1, 68-87.
41. Smit Sibinga C. Th.: Platelets for transfusioncollection processing and preservation aspects. Blut, 1987, 55, N 6, 475-482.
42. Snyder E. L., Dunn B. E., Giomette C. S., Napychank P. A., Taodon N. N., Ferri P. M., Hofm ann J. P.: Protein changes occurring during storage of platelet concentrates. A two-dimensional gelelectrophoretic analisis. Transfusion, 1987, 27, N 4, 335-341.
43. Solberg C., Moen P., Little C.: Effect of centrifugation of the storage properties of platelets. Vox. Sang., 1988, 55, N 2, 97-102..
44. Stenberg P. E., levin J.: Mechanismes of platelet production. Blood cells, 1989, 15, N 1, 23-47.
45. Thomas D. P.: Overview of venous thrombogenesis. Seminars Trombos Hemostas, 1988, 14, N 1, 1-8.
46. White lames G., Clawson C. C. The surfase-connected canalicalar system of blood platelets a fenestrated membrane system. Amer. J. Pathol. 1980. 101, N 2, 353-364.
 
 
Авторы: Лифановский Михаил Валентинович-скончался
       Ульман Валентин Анатольевич
238600, а/я23, г.Славск, Калининградская область, ул. Калининградская, 9-5.
Тел. 0116331764, E-mail: ulmann@baltnet.ru
 
 
 [u1] Скончалась от острого нарушения мозгового кровообращения в возрасте 32 лет

Уважаемый Ульман. Я вам отсылал сообщение  но сейчас его нет. Как это понимать. И к теме-организм состоит из простейших живых сообществ. Если это вам новость- то приобретайте знания. Это все посвященные давно знают.

Процитировано сообщение: LeoKartashov   от 09.02.07 :: 21:32:17:

Неподражаемо! Превосходно! Я и не знал. Спасибо, что вразумили.
Я есмь Сообщество простейших!
Интересно! Мы с Вами одного состава или разного? Просветите пожалуйста.
Это постулат нужно обязательно обсудить. Откройте тему.

Ульман. Вы не потешайтесь, если с вами общаются по серьезному. Мне эти ваши клоунские штучки никчему. За этим  можно сходить в цирк. Не скрывайтесь от вопроса - что слабо выдохлись.

Ульман. Почему вы обижаетесь. Ну кто не знал что - тромбоциды это простейшие. Главное какую они роль выполняют в организме.  А вы что то отрываете от общего и стараетесь создать индивидуальность. Нет этого в организме. Это ему смерть. А вы бредни общественной жизни переносите на биологический форум.

Ульман. Что вы хотели сказать нового в биологии.Все что вами сообщено давно известно. Если есть новое то выделите пожалуста для просмотра.